Noworodkowe terapie ukierunkowane na receptor Fc w neurologii

W całym królestwie zwierząt wielowartościowość odróżnia przeciwciała od wszystkich innych członków nadrodziny immunoglobulin. Siły ewolucyjne zachowujące wielowartościowość ponad innymi strukturalnymi cechami charakterystycznymi przeciwciał pozostają jednak nie do końca zdefiniowane. Tutaj opracowujemy monowalentne formaty przeciwciał kompetentnych pod względem Fc lub z niedoborem, aby zbadać mechanizmy ochrony przeciwciał neutralizujących (nAbs) i przeciwciał nieneutralizujących (nnAbs) u myszy zakażonych wirusem.

Biwalentność przeciwciał umożliwia wiązanie wirionów z zakażoną powierzchnią komórki, hamuje uwalnianie wirionów w hodowli komórkowej i tłumi obciążenie wirusem in vivo niezależnie od oddziaływań receptora Fc gamma (FcγR). W zamian, formaty przeciwciał monowalentnych albo nie hamują uwalniania wirionów, ani nie chronią in vivo, albo ich skuteczność ochronna jest w dużej mierze zależna od FcγR. Ochrona u myszy koreluje raczej z aktywnością nAb i nnAb hamującą uwalnianie wirusa niż z ich zdolnością neutralizacyjną. Obserwacje te dostarczają mechanistycznego wglądu w ewolucyjną konserwację biwalencji przeciwciał i pomagają uściślić korelacje ochrony nnAb w rozwoju szczepionek.

Kolostrogeneza jest odrębną i unikalną fazą aktywności komórek nabłonka gruczołu sutkowego, występującą na kilka tygodni przed porodem i kończącą się raczej gwałtownie po urodzeniu u bydła.

  • Celem badań było określenie, co kontroluje ten proces i w jaki sposób wytwarza on wysokie stężenia określonych biologicznie aktywnych składników ważnych dla noworodka. W tym przeglądzie rozważamy skład siary i skupiamy się na składnikach, które pojawiają się w pierwszej dojonej siarze w stężeniach przekraczających stężenie w surowicy krwi.
  • Receptor Fc noworodka (FcRn) jest rozpoznawany jako główna immunoglobulina G (IgG) i białko wiążące albuminy, które odpowiadają za długi okres półtrwania białek. Integrujemy działanie wychwytu pinocytotycznego (fazy płynnej) składników zewnątrzkomórkowych i łączymy je z FcRn w sortowaniu endosomów.
  • Definiujemy i badamy sposoby wiązania, sortowania i transcytotycznego dostarczania IgG1 podczas recyklingu IgG2 i albuminy. Rozważamy sposoby uwalniania ligandów z receptora w endosomie i opisujemy nowy mechanizm wydzielania ładunku do siary bez pojawiania się samego FcRn w siarze.
  • Integrujemy rodzinę insulinopodobnych czynników wzrostu, z których niektóre są wysoce skoncentrowanymi bioaktywnymi składnikami siary, z mechanizmami związanymi z działaniem endosomów FcRn. Oprócz wydzielania, podkreślamy ostatnie odkrycia dotyczące roli FcRn w fagocytozie i prezentacji antygenu oraz wiążemy jego znaczącą i nagłą zmianę w lokalizacji komórkowej po porodzie z rolą w zapobieganiu i odporności na infekcje mastitis. Receptor Fc dla IgM , FcMR, jest niezwykły, ponieważ jest preferencyjnie wyrażany przez komórki adaptacyjnego układu odpornościowego.
  • Jest to ponadto jedyny receptor Fc ulegający konstytutywnej ekspresji na ludzkich limfocytach T. Wysiłki zmierzające do odszyfrowania normalnych funkcji FcMR zostały utrudnione przez specyficzne dla gatunku wzorce ekspresji w limfocytach myszy (komórki B) w porównaniu z ludźmi (komórki B, NK i T). W komórkach ludzkich doniesiono, że ekspresja FcMR na powierzchni komórek jest niska na poziomie wyjściowym ex vivo, przy czym jednym sugerowanym wkładem jest indukowana przez ligand internalizacja przez surowicze IgM. Rzeczywiście, wstępna inkubacja przez noc w pożywce hodowlanej wolnej od IgM jest zalecana do badań FcMR, ponieważ w tych warunkach ekspozycja powierzchniowa jest zwiększona.
  • Zbadaliśmy prezentację FcMR na ludzkich limfocytach w PBMC i odkryliśmy, co zaskakujące, że poziom IgM nie miał wpływu na FcMR na powierzchni komórek, a zamiast tego był regulowany w dół w hodowlach o wysokiej gęstości komórek przez jeszcze nieokreślony mechanizm . Odkryliśmy ponadto, że przetwarzanie ex vivo pełnej krwi zmniejszyło FcMR powierzchni, potwierdzając ideę, że ekspresja FcMR jest prawdopodobnie większa na krążących limfocytach niż wcześniej sądzono. Podsumowując, odkrycia te dają nowe przewidywania, gdzie i kiedy FcMR może być dostępny dla interakcji funkcjonalnych in vivo.

Autoprzeciwciała są coraz częściej rozpoznawane ze względu na ich potencjał patogenny w coraz większej liczbie chorób neurologicznych.

Podczas gdy myasthenia gravis reprezentuje prototypową chorobę neurologiczną, w której pośredniczą przeciwciała (Ab), w ciągu ostatnich dwóch dekad zidentyfikowano o wiele więcej zaburzeń charakteryzujących się tym, że przeciwciała są ukierunkowane na antygeny neuronalne lub glejowe. Ubytek humoralnych składników immunologicznych, w tym immunoglobuliny G (IgG), poprzez wymianę osocza lub immunoadsorpcję, jest skuteczną strategią terapeutyczną w większości tych stanów chorobowych.

Noworodkowy receptor Fc (FcRn), wyrażany głównie przez komórki śródbłonka i szpiku, ułatwia recykling IgG i wydłuża okres półtrwania cząsteczek IgG. Blokada FcRn zapobiega wiązaniu endogennej IgG do FcRn, co zmusza te przeciwciała do degradacji lizosomalnej, prowadząc do wyczerpania IgG. Zwiększenie degradacji endogennej IgG przez terapie ukierunkowane na FcRn okazało się potężnym podejściem terapeutycznym u pacjentów z uogólnionym MG i jest obecnie testowane w badaniach klinicznych pod kątem kilku innych chorób neurologicznych, w tym autoimmunologicznych encefalopatii, zaburzeń ze spektrum zapalenia nerwu wzrokowego i neuropatii zapalnych. Niniejszy przegląd ilustruje mechanizmy terapii ukierunkowanych na FcRn i ocenia ich potencjał w leczeniu chorób neurologicznych.

Receptor Fc (FcR) jest ważnym receptorem opsoninowym na powierzchni komórek odpornościowych, odgrywającym ważną rolę w zależnej od przeciwciał odporności komórkowej.

Nasza poprzednia praca wykazała, że ​​FcR flądry wykazywał wyraźną odpowiedź ekspresyjną w fagocytujących komórkach IgM +  B, co sugerowało, że FcR może uczestniczyć w regulacji fagocytozy opsonizowanej przez Ig. W niniejszej pracy, w celu wyjaśnienia potencjalnej roli FcR w pośredniczeniu w fagocytozie  limfocytów IgM + B, przygotowano surowicę przeciw E. tarda flądry  i inaktywowano dopełniacz do użycia w  opsonizacji E. tarda  oraz surowicę zdrowej flądry były używane jako kontrola.

Analiza cytometrii przepływowej wykazała, że ​​wskaźniki fagocytozy  E. tarda  opsonizowanych antysurowicą w limfocytach mIgM +  B krwi obwodowej były znacznie wyższe niż w grupie kontrolnej, a wyższe wskaźniki fagocytozy limfocytów mIgM +  B można było wykryć wraz ze wzrostem czasu inkubacji w zakresie od 1 do 5 godz. Wskaźniki fagocytozy  E. tarda  opsonizowanej antysurowicą przez limfocyty mIgM +  B dla czasu inkubacji 1, 3 lub 5 godzin wynosiły odpowiednio 51,1, 63,0 i 77,5%, i były znacznie wyższe niż wskaźniki fagocytozy w grupach kontrolnych z 40,2 , odpowiednio 50,9 i 63,8%. Podczas gdy fragment Fc IgM na powierzchni opsonizowanej  E. tarda została zablokowana przez królicze przeciwciała poliklonalne IgM przeciwko flączce, wskaźniki fagocytozy limfocytów mIgM +  B znacznie spadły w porównaniu z grupą niezablokowaną. Co więcej, odsetek limfocytów mIgM +  B z wyższymi poziomami wewnątrzkomórkowych reaktywnych form tlenu (ROS) wzrósł do 32,1% z poziomu kontrolnego 23,0% po fagocytozie opsonizowanego antysurowicą  E. tarda .

Fc Receptor Blocker, 15ml

NB309-15 Innovex 15 ml 470.4 EUR

Color Reagent A, 15ML

X094-15ML Arbor Assays 15ML 146.4 EUR

Color Reagent B, 15ML

X095-15ML Arbor Assays 15ML 146.4 EUR

Fc Receptor Blocker; 4X Concentrate, 15ml NEW

NB309-4X-15 Innovex 15 ml of 4X 930 EUR

15ML , CONICAL BOTTOMED TUBE WITH CAP, UNASSEMBLED

SCT-15ML-500 CORNING 50/pk 111.6 EUR

Amersham ECL blocking agent 40g

RPN2125 Scientific Laboratory Supplies EACH 70.68 EUR

Goat Anti-Human IgM (Fc 5u) Antibody (HRP)

abx023528-15ml Abbexa 1.5 ml 610.8 EUR

Sheep IgG-Fc ELISA Kit, 96 tests, Quantitative

7615-Fc Alpha Diagnostics 1 kit 854.4 EUR

Horse IgG-Fc ELISA Kit, 96 tests, Quantitative

7715-Fc Alpha Diagnostics 1 kit 854.4 EUR

15ML , CONICAL BOTTOMED TUBE WITH CAP, ASSEMBLED, PRE-STERILIZED

SCT-15ML-25-S CORNING 25/pk 133.2 EUR

Dog IgG (Fc) fragment (isotype control, non-immune), purified

20016-FC Alpha Diagnostics 0.5 mg 300 EUR

15ML , CONICAL BOTTOMED TUBE WITH CAP, RACKED, ASSEMBLED, PRE-STERILIZED

SCT-15ML-R-S CORNING 50/pk 146.4 EUR

Human IgG (Fc) fragment, purified

20007-1-FC Alpha Diagnostics 0.5 mg 249.6 EUR

Mouse IgG (Fc) fragment, purified

20008-1-FC Alpha Diagnostics 0.5 mg 300 EUR

Rabbit IgG (Fc) fragment, purified

20009-1-FC Alpha Diagnostics 0.5 mg 300 EUR

Goat IgG (Fc) fragment, purified

20011-1-FC Alpha Diagnostics 0.5 mg 300 EUR

Rat IgG (Fc) fragment, purified (isotype control)

20005-1-FC Alpha Diagnostics 0.5 mg 300 EUR

Goat IgG (fc)-Biotin conjugate (isotype control)

20011-Fc-B Alpha Diagnostics 100 ug 196.8 EUR

Goat IgG (fc)-FITC conjugate (isotype control)

20011-Fc-F Alpha Diagnostics 100 ug 196.8 EUR

Goat IgG (fc)-HRP conjugate (isotype control)

20011-Fc-HP Alpha Diagnostics 100 ug 196.8 EUR

Antitumor agent-3

HY-15961 MedChemExpress 5mg 639.6 EUR

Antifungal agent 1

HY-102025 MedChemExpress 50mg 2664 EUR

Antiulcer Agent 1

HY-U00122 MedChemExpress 1mg 391.2 EUR

Anticonvulsant agent 1

HY-U00348 MedChemExpress 5mg 3415.2 EUR

Bronchospasmolytic agent 1

HY-U00405 MedChemExpress 1mg 555.6 EUR

Antitumor agent-4

HY-U00414 MedChemExpress 20mg 16126.8 EUR

Bifunctional Antiplatelet Agent

H-1662.0001 Bachem 1.0mg 356.4 EUR

Bifunctional Antiplatelet Agent

H-1662.0005 Bachem 5.0mg 1311.6 EUR

Dog IgG (Fc) fragment (isotype control, non-immune), purified

20016-3-FC Alpha Diagnostics 0.5 mg 300 EUR

Dog IgG Fc-Biotin Conjugate (isotype control, non-immune), purified

20016-FC-B Alpha Diagnostics 0.1 mg 270 EUR

Dog IgG Fc-FITC Conjugate (isotype control, non-immune), purified

20016-FC-F Alpha Diagnostics 0.1 mg 270 EUR

Dog IgG Fc-HRP Conjugate (isotype control, non-immune), purified

20016-FC-HP Alpha Diagnostics 0.1 mg 270 EUR

15PL 15mL Rack for 15mL Tubes

HS23215 Scientific Laboratory Supplies EACH 35.45 EUR

EL Transfection Reagent

20-abx098880 Abbexa
  • 460.80 EUR
  • 644.40 EUR
  • 0.75 ml
  • 1.5 ml

Sufa synergist agent(SSA)

AG243 Unibiotest 1 mg 627.6 EUR

Sufa synergist agent(SSA)

AT243 Unibiotest 1mg 1641.6 EUR

Anti-inflammatory agent 1

HY-U00273 MedChemExpress 10mg 1746 EUR

Anti-inflammatory agent 2

HY-U00299 MedChemExpress 20mg 5763.6 EUR

Anti-neurodegeneration agent 1

HY-U00314 MedChemExpress 20mg 5763.6 EUR

Decitabine (DNA hypomethylation agent)

SIH-352-10MG Stressmarq 10 mg 192 EUR

Decitabine (DNA hypomethylation agent)

SIH-352-50MG Stressmarq 50 mg 406.8 EUR

Vildagliptin (Anti-diabetic agent)

SIH-567-100MG Stressmarq 100 mg 277.2 EUR

Vildagliptin (Anti-diabetic agent)

SIH-567-20MG Stressmarq 20 mg 138 EUR

Label 100X100 Oxidizing Agent..

C47AS Scientific Laboratory Supplies EACH 4.89 EUR

Label 200X200 Oxidizing Agent..

C47BS Scientific Laboratory Supplies EACH 12.45 EUR

Recombinant (HEK) Human IgG3-Fc (99-377aa, His-tag, >95%, low endotoxin)

20007-G3-FC Alpha Diagnostics 50 ug 343.2 EUR

Rat IgG (Fc)-Biotin Conjuagte (isotype control), purified

20005-1-FC-B Alpha Diagnostics 0.1 mg 270 EUR

Rat IgG (Fc)-FITC Conjuagte (isotype control), purified

20005-1-FC-F Alpha Diagnostics 0.1 mg 270 EUR

Rat IgG (Fc)-HRP Conjuagte (isotype control), purified

20005-1-FC-HP Alpha Diagnostics 0.1 mg 270 EUR

Human IgG (Fc) fragment, purified (>95%, low endotoxin)

20007-1-FC-LE Alpha Diagnostics 100 ul 270 EUR

Recombinant (HEK) Mouse IgG2a-Fc (98-330aa, ~34 kda, His-tag, >95%, low endotoxin)

20102-102-FC Alpha Diagnostics 50 ug 343.2 EUR

Recombinant (HEK) Mouse IgG2b-Fc (97-335aa, ~37 kda, His-tag, >95%, low endotoxin)

20102-103-FC Alpha Diagnostics 50 ug 343.2 EUR

Recombinant (HEK) Mouse IgG3-Fc (97-329aa, ~33 kda, His-tag, >95%, low endotoxin)

20102-104-FC Alpha Diagnostics 50 ug 343.2 EUR

Recombinant (HEK) Human IgG1 Fc (103Cys/Ser, 99-330aa, His-tag, >95%, low endotoxin)

20007-G1-FC Alpha Diagnostics 50 ug 343.2 EUR

Recombinant (HEK) Human IgG2-Fc (257Ser/Ala, 99-327aa, His-tag, >95%, low endotoxin)

20007-G2-FC Alpha Diagnostics 50 ug 343.2 EUR

Recombinant (HEK) Human IgG4-Fc (108Ser/Pro, 99-327aa, His-tag, >95%, low endotoxin)

20007-G4-FC Alpha Diagnostics 50 ug 343.2 EUR

Recombinant Human CD47 Protein, His-Fc (IgG), Insect-10ug

QP11336-HIS-Fc-10ug EnQuireBio 10ug 241.2 EUR

Recombinant (HEK) Mouse IgG1-Fc (98-321aa, 102Cys/Ser, ~32 kda, His-tag, >95%, low endotoxin)

20102-101-FC Alpha Diagnostics 50 343.2 EUR

Anti-Heart Failure Agent 1

HY-101729 MedChemExpress 20mg 12754.8 EUR

5-Azacytidine (DNA hypomethylation agent)

SIH-345-250MG Stressmarq 250 mg 208.8 EUR

5-Azacytidine (DNA hypomethylation agent)

SIH-345-50MG Stressmarq 50 mg 126 EUR

Reducing Agent (for Silica Testing)

RAST01 Scientific Laboratory Supplies 100ML 102.6 EUR

CO2 Std CO2 Release Agent

RR0207 Scientific Laboratory Supplies 1L 131.1 EUR

Human IgG Fc-Biotin conjugate (isotype control, non-immune), purified

20007-1-Fc-B Alpha Diagnostics 0.1 mg 196.8 EUR

Human IgG Fc-FITC conjugate (isotype control, non-immune), purified

20007-1-Fc-F Alpha Diagnostics 0.1 mg 196.8 EUR

Human IgG Fc-HRP conjugate (isotype control, non-immune), purified

20007-1-Fc-HP Alpha Diagnostics 0.1 mg 196.8 EUR

Fc Receptor Blocker, 60ml

NB309 Innovex 60 ml 999.6 EUR

Fc Receptor Blocker, 30ml

NB309-30 Innovex 30 ml 609.6 EUR

Fc Receptor Blocker, 5ml

NB309-5S Innovex 5 ml 225.6 EUR

AEC Enhancer, 15ml

NB319 Innovex 15 ml 266.4 EUR

Colorex MRSA (15ml)

MED1282 Scientific Laboratory Supplies PK10 12.44 EUR

Tube support 15mL

MIX1348 Scientific Laboratory Supplies EACH 96.9 EUR

Conical Tubes 15mL

E0030122208 Scientific Laboratory Supplies PK200 70.68 EUR

Conical Tubes 15mL

E0030122259 Scientific Laboratory Supplies PK100 80.94 EUR

Volumetric Pipette 15mL

PIP1228 Scientific Laboratory Supplies PK12 343.14 EUR

Phase Separator 15ml

CHR5382 Scientific Laboratory Supplies PK100 118.56 EUR

CoolRack 15ml holds 9 x 15ml conical centrifuge tube

432061 Scientific Laboratory Supplies EACH 343.14 EUR

PCR SuperMix (-dye)

20-abx098002 Abbexa
  • 493.20 EUR
  • 226.80 EUR
  • 309.60 EUR
  • 15 ml
  • 1 ml
  • 5 ml

PCR SuperMix for PAGE (+dye)

20-abx098004 Abbexa
  • 493.20 EUR
  • 226.80 EUR
  • 309.60 EUR
  • 15 ml
  • 1 ml
  • 5 ml

Green qPCR SuperMix

20-abx098031 Abbexa
  • 1245.60 EUR
  • 526.80 EUR
  • 760.80 EUR
  • 15 ml
  • 1 ml
  • 5 ml

Green qPCR SuperMix UDG

20-abx098032 Abbexa
  • 1362.00 EUR
  • 543.60 EUR
  • 794.40 EUR
  • 15 ml
  • 1 ml
  • 5 ml

Probe qPCR SuperMix

20-abx098040 Abbexa
  • 1245.60 EUR
  • 526.80 EUR
  • 760.80 EUR
  • 15 ml
  • 1 ml
  • 5 ml

Human IgG (Fc) fragment-Biotin purified (>95%, low endotoxin)

20007-1-FC-LE-B Alpha Diagnostics 25 ug 343.2 EUR

Bialaphos sodium - bar gene selective agent

B013-100MG TOKU-E 100 mg 186 EUR

Bialaphos sodium - bar gene selective agent

B013-500MG TOKU-E 500 mg 688.8 EUR

Attoglow Western Blot Analysis Kit:Blocking Agent

K3171250-3 Biochain 40 g 130.8 EUR

CO2 Std CO2 Release Agent 200mL

RR021 Scientific Laboratory Supplies PK6 169.86 EUR

Recombinant (HEK) Rabbit IgG (Fc) (101-323aa, 185Thr/Asn284Ser, ~33 kda, >95%, Low Endotoxin)

20009-1-R-FC Alpha Diagnostics 50 ug 343.2 EUR

Conical Tubes 15ml Racked

339651 Scientific Laboratory Supplies PK500 348.84 EUR

Bottle Hdpe Amber 15Ml

2004-9050 Scientific Laboratory Supplies PK12 18.24 EUR

Bottle Alpha 15ml Amber

BOT2036 Scientific Laboratory Supplies PK110 67.03 EUR

Block 12 x 15mL

MIX7214 Scientific Laboratory Supplies EACH 524.4 EUR

Crucible Silica 15ml 41x25mm

CRU3004 Scientific Laboratory Supplies EACH 43.32 EUR

Nalgene 15ml Cryo Container

CRY8320 Scientific Laboratory Supplies PK75 172.14 EUR

Eppendorf 15mL Tubes Sterile

E0030122151 Scientific Laboratory Supplies PK500 163.02 EUR

15mL Conical Tubes Amber

E0030122194 Scientific Laboratory Supplies PK200 66.12 EUR

Tube Holder 5/15mL

E5353040148 Scientific Laboratory Supplies EACH 100.32 EUR

Adapter 15mL for nonaerosoltight

E5920710001 Scientific Laboratory Supplies EACH 281.58 EUR

Bacteria lysing CK01-15mL

HOM1096 Scientific Laboratory Supplies PK25 182.4 EUR

Tissue grinding CKMix50-15mL

HOM1098 Scientific Laboratory Supplies PK25 181.26 EUR

Stwierdzono, że FcγRII i Syk były znacząco podwyższone, podczas gdy FcγRIII był znacząco obniżone w limfocytach mIgM +  B po fagocytozie. Ponadto, gdy FcγRII limfocytów mIgM +  B był blokowany przez wytworzone przeciwciała, ich współczynnik fagocytozy  E. tarda opsonizowanych surowicą  wynosił 39,0%, co było znacznie niższe niż w grupie odblokowanej 54,0%. Wyniki te pokazują, że FcR odgrywa kluczową rolę w pośredniczeniu w fagocytozie i aktywności bakteriobójczej limfocytów mIgM +  B, co ułatwiłoby lepsze zrozumienie ról regulatorowych FcR w fagocytozy limfocytów teleost B.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany. Wymagane pola są oznaczone *